Сибирский научно-исследовательский институт птицеводства

Птицеводство №4 2011г. с.61-62

ВЛИЯНИЕ БЕТУЛИНА НА ИММУННУЮ СИСТЕМУ ЦЫПЛЯТ-БРОЙЛЕРОВ ПРИ ВАКЦИНАЦИЯХ

М. Задорожная , СибНИИП Россельхозакадемии.

     Аннотация: Показано иммуностимулирующее действие бетулина на состояние организма при вакцинации цыплят против ньюкаслской болезни и инфекционного бронхита кур.

     Ключевые слова: тимус, фабрициева бурса, иммуностимулятор, поствакцинальные антитела.

     Summary: Immunostimulating activity of betulin in chicks at vaccinations against Newcastle disease and infectious bronchitis is shown. 

     Keywords: thymus, bursa, immunostimulator, postvaccinal antibodies.

     При промышленном содержании птицы, специалисты птицефабрик столкнулись с целым рядом проблем, связанных с биологией и технологическими условиями ее выращивания. При концентрации большого поголовья на ограниченной территории серьезную угрозу представляют инфекционные болезни вирусной и бактериальной этиологии, для предупреждения которых на птицефабриках разработаны и широко используются различные схемы лечебно-профилактических мероприятий, включающие вакцинации, антибиотикотерапию. Однако они не обеспечивают полную защиту поголовья, и это объясняется не слабой биологической активностью вакцин, а снижением иммунологической реактивности птицы под влиянием различных стресс-факторов.

     Резистентность организма принято подразделять на специфическую (иммунный ответ) и неспецифическую защиту. Обе включают в себя врожденную и приобретенную резистентность. Различают гуморальные и клеточные факторы защиты. Как гуморальный, так и клеточный иммунный ответ - это комплексный процесс, развивающийся в результате взаимодействия различных типов клеток: В-, Т-,  А (фагоцитов), сопровождающийся выработкой специфических антител.

     К центральным органам иммунитета птицы относят тимус, фабрициевую сумку (бурсу). В тимусе происходит формирование Т-лимфоцитов, а в бурсе - В-лимфоцитов. При этом Т-лимфоциты - хранители иммунологической памяти об антигене - приобретают способность стимулировать В-лимфоциты к пролиферации и дифференцировке в плазматические клетки, продуцирующие специфические антитела (JgМ, JgG) против антигена. Фабрициева сумка служит единственным источником В-клеток и снабжает ими весь организм птицы в течение первых месяцев жизни. Далее по мере ее атрофии данная функция передается селезенке.

     Положительное влияние на физиологическое состояние организма и формирование поствакцинального иммунитета оказывает применение иммуномодуляторов, иммуностимуляторов. При этом следует исключить антибиотики, сульфаниламиды и другие препараты, тормозящие активность лимфоидно-макрофагальной системы и иммуногенез. Одним из таких иммуностимуляторов является бетулин ─  (betulin, бетунол, березовая камфора, луп-20 (29)-ен-3β, 28- диол) ─ пентациклический тритерпеновый спирт ряда лупана ─ один из основных компонентов коры различных видов рода березы. Это кристаллический порошок кремового цвета с содержанием бетулина 80 и более процентов. Он обладает ценными фармакологическими свойствами: антиоксидантными, антисептическими, противовоспалительными, гепатопротекторными, иммуномодуляторными, противовирусными, антибактериальными, гипохолестеринемическими и др.

     В ветеринарии были получены положительные результаты при применении бетулина на мышах, крупном рогатом скоте, собаках. В отечественной и зарубежной литературе данные по влиянию препарата на организм птицы отсутствуют. Цель нашей работы – определить его действие на иммунную систему цыплят-бройлеров при вакцинациях против вирусов ньюкаслской болезни (НБ) и инфекционного бронхита кур (ИБК).

      Исследования проводили в Сибирском научно-исследовательском институте птицеводства на суточных цыплятах-бройлерах. Были скомплектованы контрольная и шесть опытных групп. Испытаны различные схемы применения бетулина. В экспериментах использовали 83% бетулина производства ООО "След" (г.Пермь), который вводили в корм. В возрасте семи дней была проведена вакцинация цыплят против НБ и ИБК в соответствии с инструкцией по применению данных вакцин.

     В крови цыплят-бройлеров определяли количество Т-, В-лимфоцитов через 1 и 2 недели после вакцинации в возрасте 14, 21 дней соответственно.

     Кровь для иммунологических исследований брали из подкрыльцовой вены в пробирки, предварительно обработанные 1%-ным раствором гепарина. Лимфоциты из периферической крови получали по методу Бейюма. Для этого кровь разбавляли средой 199 в соотношении 1:2 и наслаивали ее по стенке центрифужной пробирки на 2 мл фиколл-верографинового градиента плотностью 1,077 г/л, пробирку центрифугировали 40 мин при 1500 об./мин. Лимфоциты, образующие беловатое кольцо над разделяющим раствором, отсасывали пастеровской пипеткой и трижды отмывали раствором Хенкса. Т- лимфоциты выявляли с помощью теста прямого (спонтанного) розеткообразования с эритроцитами барана; Т- хелперы - пробой с теофилином; В-лимфоциты – с помощью реакции комплементарного розеткообразования с эритроцитами быка, образовывавшими иммунные комплексы с гетерофильными антителами и комплементом.

     Еженедельно определяли наличие поствакцинальных антител в сыворотке крови к вирусу НБ в реакции задержки гемагглютинации с применением диагностических наборов ВНИИЗЖ, к вирусу ИБК - методом иммуноферментного анализа с использованием тест-системы BioChek.

     Использование бетулина оказало положительное влияние на иммунитет цыплят-бройлеров. Содержание иммунокомпетентных клеток у цыплят вакцинированных против вируса НБ и ИБК, представлены в таблице (в %).

     Через неделю после вакцинации количество В-лимфоцитов во всех группах было выше нормы (27-32%) на 1-29 процентов. Опытные группы превышали контроль на 4-28 процентов. Наибольшее количество было в 4-й и 6-й группах, где давали максимальную дозу препарата. В возрасте 21 дня, когда процесс антителообразования наиболее интенсивен, у цыплят всех групп количество В-лимфоцитов выше нормы на 26-61 процент. Опытные группы превышали контроль на 10-35 процентов. Максимальное их количество в 4-й группе.

     Таким образом, в опыте по иммунизации бройлеров вакцинами против НБ и ИБК в сочетании с бетулином установлено достоверное увеличение В-лимфоцитов. Эффект стимуляции В-лимфоцитов зависит от дозы и периода применения препарата, что согласуется с полученными данными. Наилучшие результаты были в 4-й группе, где доза максимальна и период применения до и после вакцинации.

     Примечание. Т-с - Т-супрессоры, Т-х - Т-хелперы

     ^* - Р≤0,05, ^** - Р≤0,01

      Количество Т- лимфоцитов в возрасте 14 дней в контрольной группе было 52% ( норма 42-52%), а в опытных группах превышало контроль на 1-13 процентов. Максимальное число их было в 4-й группе. Содержание Т-хелперов у цыплят опытных групп достоверно превышает контроль на 21-37%, при этом наибольшие показатели были в 4-й и 6-й группах. Количество Т-супрессоров во всех опытных группах было на 14-26% ниже контроля. Достоверную разницу отмечали в 1-й, 4-6-й группах. Количество Т-лимфоцитов в возрасте 21 день в опытных группах на 22-32% превышало контроль, а содержание Т-хелперов выше на 16-35 процентов. Достоверная разница была во всех опытных группах, за исключением первой. Наиболее высокий показатель зарегистрирован в 4-й группе. Количество Т-супрессоров во 2-5-й группах на 3-7% ниже контроля.

     Применение бетулина оказывало стимулирующее влияние на иммунокомпетентные клетки организма цыплят, повышая общее количество Т-лимфоцитов в основном Т-хелперное звено и подавляя активность супрессоров. Наилучшие результаты были получены в 4-й группе.

     Через неделю после вакцинации поствакцинальные антитела к вирусу ньюкаслской болезни в диагностических титрах выявлены у 100% поголовья во всех группах. При этом средний титр антител на 0,3-1,1 log₂ превышал контроль (рис.1). Наибольшее его значение 5,9 и 5,8 log ₂ отмечали в 4-й и 6-й группах, где цыплята получали препарат в максимальной дозе до и после вакцинации.

     Через две недели после вакцинации в возрасте 21 дня в опытных группах титры антител продолжали увеличиваться, тогда как в контрольной группе они остались на том же уровне. Показатели во всех опытных группах были на 0,6-1,1 log₂ выше контроля, максимальное значение в 4-й группе.

     Через пять недель после вакцинации против ИБК средний титр антител во всех опытных группах на 152-715 превышал контроль (рис. 2). Максимальные показатели отмечали в 4-й группе, где было количество иммунной птицы 66,8% (на 28,3% больше контроля).

     Заключение. Полученные результаты свидетельствуют о положительном влиянии бетулина на иммунную систему цыплят-бройлеров при вакцинациях против НБ и ИБК. Применение его оказывает стимулирующее влияние на иммунокомпетентные клетки птицы. Увеличивает количество Т-лимфоцитов, в основном хелперное звено и подавляет активность супрессоров; повышает количество В-лимфоцитов, поствакцинальные титры антител и количество иммунной птицы. Эффект стимуляции зависит от дозы и периода применения препарата. Наилучшие результаты получены при максимальной дозе до и после вакцинации. Результаты исследования подтверждают иммуностимулирующее действие бетулина на организм птицы.